التحري عن فعالية الهيمولايسين لبعض الميكروبات الممرضة لاصابات القناة التنفسية على خلايا الانسان اللمفاوية تناقش في رسالة ماجستير

ناقش قسم التحليلات المرضية في كلية العلوم التطبيقية بجامعة سامراء رسالة ماجستير بعنوان ” التحري عن فعالية الهيمولايسين لبعض الميكروبات الممرضة لاصابات القناة التنفسية على خلايا الانسان اللمفاوية تناقش في رسالة ماجستير ” والمقدمة من قبل الطالب << عقيل حازم صالح >> وذلك في يوم الخميس الموافق 20 تشرين الأول 2022 في احدى قاعات الكلية

وكانت لجنة المناقشة قد شكلت من الأساتذة الافاضل :

1- أ.د عبد الكريم جاسم هاشم ـــــ رئيساً

2- أ.د أسامة ناظم نجرس ـــــ عضواً

3- أ.م.د وائل محمد مهدي ـــــ عضواً

4- أ.د بتول عمران ذيب ـــــ عضواً ومشرفاً

5- أسماء عيسى محمود ـــــ عضواً ومشرفاً

تضمنت دراسة رسالة الماجستير :

الدراسة على المرضى المؤكد اصابتهم بعدوى الجهاز التنفسي والراقدين في ردهات العزل في مستفشى سامراء العام ومستشفى بلد العام، حيث جمعت في هذه الدراسه 120 عينة ( قشع ، مسحه ، دم) ومن كلا الجنسين وبأعمار من 10-80  سنة للمدة من 1/11/2021 ولغاية 1/3/2022 ، وتمت هذه العملية بموافقة المريض شخصيا وبعد الاطلاع على المعلومات وملئ استمارة الاستبيان من قبل المريض، كانت العينات التي تواجد بها نمو على الاوساط البكتيرية و الفطرية  المذكوره سابقا 100 عينه والتي تقدر بنسبة (83.3%) والعينات التي لم يظهر بها نمو 20 عينه والتي تقدر بنسبة (16.7%) ، حيث تم الحصول على 110 عزلة بكتيرية و فطرية

بينت النتائج من خلال العزل والتشخيص وجود انواع مختلفة من البكتريا منها 32 عزلة Staphlococcus aureus بنسبة 29% ,27Klebsiella pneumoniae بنسبة 24.513 .% Pseudomonas aeruginosa بنسبة 111.8%13 .  Haemophilus influenzae  بنسبة 11.81%Streptococcus pneumoniae 10 . بنسبة 9.09% .8  Streptococcus pyogenes  بنسبة7.2%candida albicans 7 . بنسبة 6.36% ، حيث كان اعلى عدد لعزلات البكتيرية تعود لبكتريا الموجبة ولجنس aureus Staphylococcus وعددها 32 عزلة وبنسبة )29%) , واقلها كان تعود candida albicans عددها 7 عزلات وبنسبة (6.36%) . بينت هذه النتائج بأن نسبة الاصابات بالعدوى البكتيرية التى تسببها البكتريا السالبة لصبغة كرام اعلى من تلك التي تسببها البكتريا الموجبة اذ بلغت48.18%  و 45.45% وعلى التوالي

اظهرت هذه الدراسة وجود اختلاف كبير في نسبة الاصابات بالعدوى البكتيريه باختلاف الجنس فقد كانت نسبة الاصابة لدى الذكور 73 % بواقع 73 عينة من مجموع العينات وبعدد العزلات 78 عزلة بنسبة 70.90% اما بالنسبة للاناث فكانت نسبة اصابتهم 27% بواقع 27 عينة من مجموع العينات وبعدد 32 عزلة بنسبة 29.09% .     بينت النتائج وجود اختلاف في نسبة الاصابات البكتيرية باختلاف الفئات العمرية , تراوحت اعمار المصابين من 10 الى 80 سنة والذي كان فيها اعلى عدد من الانواع البكتيرية والفطريه المعزولة ضمن الفئات العمرية 50-60 سنة وادناها كانت عند الفئات 70 سنة فما فوق

      تم اجراء اختبار  C-reactive protein و بعض المعايير الدموية  للمرضى، اظهرت نتائج الدراسة الحالية اختلاف واضحا في مستوى اختباراتWBC, LYM , GRA ,CRP   في المرضى المصابين بعدوى الجهاز التنفسي وبين المدى الطبيعي لهذة الاختبارات

    اختبرت حساسية العزلات البكتيرية تجاه 13 مضاداً حيوياً بطريقة الانتشار حول الاقراص . حيث تباينت العزلات لاستجابتها للمضادات المستخدمة في الدراسة الحالية، ان عزلات Staphlococcus aureus كانت ذات مقاومة متعددة للمضادات الحيوية و شملت Ampillicin , Oxacillin , Azethromycin, Trimethoprin , Erythromycin وبنسبة (100%) , وكانت اكثر حساسية تجاه المضاد Imepenem وبنسبة (100%) , بينما Streptococcus pyogenes بلغت اعلى نسبة حساسية 80% للمضاد Gentamycin اما بالنسبة لكل من meropenem Ampicillin, ,Azethromycin, Trimethoprinm, حيث بلغت نسبتهم المئوية لكل من المضادات السبق ذكرهم 30% ،وكانت نسبة الحساسية 60% لكل من المضادات Amoxillin/clavulanic acid   Erythromycin ,  اما بالنسبة للمضاد Ciprofloxacin فقد بلغت 60% ايضاً, ثم تدرجت باقي نسب الحساسية للمضادات الاخرى، ثم تليها levofloxacillin  و imipenem %40. بينما اضهرت مقاومة للمضادات الحيوية وبنسبة (100%) لكل من لـ Ceftriaxon, ,Oxacillin, ,Clindamycin بينما كانت  Streptococcus pneumoniae مقاومة وبنسبة 100% للمضاد ,Gentamycin وحساسة بنسبة 62.5%  لكل من Imipenem و, Meropenem وكانت اقل نسبة حساسية تجاه المضاد 37.5 Azethromycin% ما بالنسبة للمضادات اخرى فكانت حساسة وبنسبة 100% وشملت كل من,Amoxicillin\Clavulanic acid ,Levofloxacin , Ceftriaxone, ,Ampicillin , Oxacillin ,Trimethoprin , Clindamycin , Erythromycin , Ceprofloxacin, اما بالنسبة لمبكتريا السالبة لصبغة الغرام اظهرت النتائج مقاومتها تجاه المضادات الحيوية لاغلب المضادات المستخدمة في الدراسة الحالية.     تم التحري عن العزلة الاكفأ والاكثر انتاج للهيموليسين وذلك باستعمال طريقة القياس الكمي والقياس النوعي لجميع العزلات التي تم الحصول عليها بهذة الدراسة، وبينت النتأئج ان عزلاتS.aureus  التي عددها 32 عزلة بنسبة 29% جميعها كانت محللة للدم على طبق  اكار الدم وكانت العزلة الاكثر انتاجا هي S.a 27 التي اعطت اعلى قطر تثبيطي 17mm ، وبعدها تم تنقية

الهيموليسين من العزلة المنتخبة باستعمال كبريتات الامونيوم(Ammonium Sulphate) لترسيب الهيموليسين والتي تعد من الخطوات الاولية لتنقية البروتينات لما تمتاز به من كفاءة عالية في ترسيب البروتينات وبعدها تم امرار البروتين المترسب بعد ديلزته وتركيزه في عمود التبادل الايوني، وبعدها تم عزل الخلايا اللمفاوية باستخدام محلول Ficoll-Isopaque لدراسة التاثيرات السامه للهيموليسين.

    تم تقييم التأثيرات السامة للهيموليسين على الخلايا الليمفاوية البشرية لعينة الهيموليسين (عينة نقية واحدة أنتجت في المختبر لهذه الدراسة) بأربعة تركيزات مختلفة (25 و 50 و 100 و 200 ميكرولتر) باستخدام الفحص الحيوي لميثيل ثيازول تيترازوليوم (MTT). أظهرت النتائج أن النمو تم تثبيطه بنسبة 21.4 و 32.3 و 48.7 و 79.34 لكل من التركيزات الأربعة للعينة النقية ، على التوالي ، تم استخراج حمض ديوكسي ريبونوكلييك (DNA) من الخلايا الليمفاوية وتحليله بواسطة الرحلان الكهربائي على هلام أغاروز 1٪. يبدو أن الهيموليسين لديه القدرة على تحلل أو إتلاف الحمض النووي. أظهرت الدراسة الحالية أن كلا من تثبيط النمو وتلف الحمض النووي الذي تعاني منه الخلايا الليمفاوية البشرية زاد خطيا مع زيادة تركيزات السموم